抗原的制备 实验报告

一、实验目的与要求

1、掌握不同类型抗原制备、纯化方法； 2、了解常用佐剂；

3、掌握玻璃器材如培养皿、试管、锥形瓶等的包扎、高压灭菌方法。 二、实验内容

猪链球菌7型全菌抗原制备 猪链球菌7型荚膜多糖抗原制备 三、实验步骤

1、实验器材的准备。将实验所需的锥形瓶、培养皿等玻璃器材洗净并高压灭菌；配制100mL营养肉汤培养基并高压灭菌。

2、纯化7型猪链球菌。取冻存的7型猪链球菌纯菌，在超净工作台中将吸附该菌的小瓷珠放在培养基（已加入10mL葡萄糖、5mL小牛血清）上滚上一周，37℃培养24h；24h后，在超净工作台中挑菌涂片，革兰氏染色镜检；确认为猪链球菌后划线接种于新的培养基中，37℃培养20h。

3、灭活及加佐剂。挑取单菌落超净工作台下接种于200mL液体培养基，37℃培养14h，涂片后革兰氏染色镜检，确认为猪链球菌后，逐滴加入0.4mL福尔马林37℃灭活6h，一边加一边振荡；取一部分接种于液体培养基37℃培养24h，观察有无浑浊，确认无菌后加入50mL铝胶佐剂，混匀备用，即为猪链球菌全菌抗原，4℃保存。

4.，荚膜多糖抗原（诊断抗原）的制备：7型猪链球菌1ml菌液至离心管中，离心 7000r/min 5min，弃去上清液，保留沉淀，加入50ul生理盐水，重悬菌渣 ，沸水煮10min后，即为诊断抗原 。 四、实验结果及分析

第一次和第二次革兰氏染色镜检结果均为蓝紫色短链状球菌，也有许多单个球菌，这与王欢[1]等人的研究结果相符，即猪链球菌为革兰氏阳性球菌，以成对或单个者为多，偶见3个~5个短链。又因为我们取的是冻存的7型纯种，所以可以认为7型猪链球菌复苏成功。加入0.2%福尔马林灭菌后再次培养无浑浊出现说明猪链球菌已完全失活。

参考文献

[1]王欢,邓治邦.猪链球菌病及其疫苗研究进展[J].动物医学进展,2009,30(1):84-88.