布洛芬凝胶的药效学研究

中国药物与临床２０１０年１Ｏ月第１Ｏ卷第１０期Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１０，Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．１０　・药物研究・　布洛芬凝胶的药效学研究　宋高潮宋欣　布洛芬是一种常用的非甾体抗炎药Ｅ１］。但口服后会出现　ｍｉｎ时小鼠的痛反应（舔后足或抬后足并回头）时问，如小鼠　不同程度的胃部不适、恶心、呕吐、胃溃疡、头痛、头晕等不良　反应。药物经皮给药是非甾体抗炎镇痛药有效给药途径之　一，它可以提高患部药物浓度，增强局部抗炎作用，并有利于　避免其胃肠道不良反应＿２　＿。凝胶剂作为新剂型，与其他经皮　给药剂型相比，具有使用方便、起效快、维持时间长、稳定、作用　好的特点，透皮吸收好，可较迅速地缓解局部炎症及疼痛｜３Ｊ。目　前尚未见到关于布洛芬经皮给药的相关研究报道，本实验以　双氯芬酸凝胶剂为对照药物，观察布洛芬凝胶制剂的抗炎镇　痛作用，为其临床应用提供实验依据。　１材料与方法　１．１仪器与试剂　１．１．１仪器：ＨＨ一２型数显恒温水浴锅（上海浦东物理光学　仪器厂）；ＦＡ１　１０４型电子天平（上海民桥精密科学仪器有限公　司）；千分尺（北京第二量具厂）；无菌注射器；剪刀；打孑Ｌ器。　１．１．２试剂：硫化钠（天津市北辰方正试剂厂）；０．６％的醋酸　（分析纯，天津市北辰方正试剂厂）；二甲苯（分析纯，天津市　天新精细化工开发中心）：卡拉胶（天津市博迪化工有限公　司）；布洛芬凝胶剂，（自制，淡白色半透明水凝胶，规格：含　量：１０　ｍｇ／ｇ）；双氯芬酸钠凝胶（武汉马应龙药业集团股份有　限公司，批号：Ｈ１０９５０２１４，规格：０．１　ｇ／１０　ｇ）。　１．２实验方法　１．２．１醋酸致小鼠扭体实验：昆明小鼠５０只，雌雄各半，体质　量２０～２５　ｇ，随机分为５组，分别为空白对照组、阳性对照组　（双氯芬酸钠１０　ｍｇ／ｋｇ），布洛芬凝胶（４７，９８，３２０　ｍｇ／ｋｇ）组。　各组小鼠用硫化钠腹部去毛，去毛面积不小于１．５　ｃｍ￣１．５　ｅｍ，在去毛处分别涂抹不同剂量药物和阳性对照，空白对照　给予等量凝胶溶媒（量同布洛芬低剂量组）。３０　ｍｉｎ后腹腔注　射０．６％的冰醋酸。观察记录注射致痛剂后１５　ｍｉｎ内小鼠扭　体次数。计算镇痛百分率［镇痛百分率＝（对照组扭体反应次　数一给药组扭体反应次数），对照组扭体反应次数￣１００％］。　１．２．２热板法：昆明小鼠５０只，雌性，体质量２２　３０　ｇ，将热　板温度调至（５５．０￣０．５）℃，置小鼠于热板上，测定各小鼠的正　常痛反应（舔后足或抬后足并回头）时间，共测２次，每次间　隔５　ｍｉｎ，以平均值在５～３０　ｓ内为合格选出４０只小鼠。随机　分为５组，分别为对照组给予等量凝胶溶媒（量同布洛芬低　剂量组），阳性对照组（双氯芬酸钠１０　ｍｇ／ｋｇ），布洛芬凝胶组　（４７，９８，３２０　ｍｇ／ｋｇ），给药后分别记录１５，３０，４５，６０，９０，１２０　作者单位：０３０００１太原，山西医科大学第二医院药剂科　在热板上６０　Ｓ无反应按６０　Ｓ计算。计算痛阈提高率［痛阈提　高率＝（给药后痛反应时间一给药前痛反应时间）／给药前痛反　应时间ｘ１００％１。　１．２．３二甲苯致小鼠耳肿胀实验：昆明小鼠５０只，雌雄各半，　体质量２２　３０　ｇ，随机分为５组，分别为空白对照组（在两耳正　反两面涂等量的凝胶溶媒。量同布洛芬低剂量组）．阳性对照　组（在两耳正反两面涂１０　ｍｇ／ｋｇ的双氯芬酸钠凝胶），布洛芬　凝胶组（在两耳正反两面涂不同量的布洛芬凝胶４７，９８，３２０　ｍｇ／ｋｇ），１　ｈ后各组小鼠右耳涂２０　ｌ二甲苯致炎，３０　ｒａｉｎ后　迅速脱颈椎处死，沿耳廓剪下双耳，用直径８　ｍｍ的不锈钢圆　冲沿耳缘相同部位冲下，用电子天平称质量。以左右耳质量　差作为肿胀度，并计算肿胀抑制率［肿胀抑制率＝（对照组平　均肿胀度一给药组平均肿胀度），对照组平均肿胀度ｘ１００％］。　１．２．４角叉莱胶致大鼠足跖肿胀实验：Ｗｉｓｔａｒ大鼠５０只．雄　性，体质量１５０—１７０　ｇ，随机分为空白对照组，阳性对照组（双　氯芬酸钠１０　ｍｇ／ｋｇ），布洛芬凝胶组（各组大鼠左后足涂抹不　同剂量的布洛芬３０，７０，１６８　ｍｇ／ｋｇ），空白对照组给予等量溶　媒（量同布洛芬低剂量组），给药１　ｈ后，于大鼠左右足跖皮下　注射１％的角叉莱胶０．１　ｍｌ致炎，分别在致炎前后３０，６０，９０，　１２０，２４０，７００　ａｒｉｎ，用千分尺测定致炎侧足的肿胀度，计算各　组的肿胀度，致炎后６０　ａｒｉｎ时的抑制率［肿胀抑制率＝（对照　组平均肿胀度一给药组平均肿胀度）／ｘ￣照组平均肿胀度×　１００％，肿胀度＝致炎后的足上下径一致炎前的足上下径］。　１．３统计学处理　实验数据采用ｘ￣ｓ表示。采用ＳＰＳＳ　１　３．０统计软件进行　单因素方差分析和重复测量数据的方差分析。组问两两比较　采用ＬＳＤ法以及Ｄｕｎｎｅｔ法进行检验。以Ｐ＜０．０５为差异有统　计学意义。　２结　果　２．１凝胶剂对醋酸致小鼠扭体实验的影响：见表ｌ。　表１各组小鼠扭体实验的结果比较（　）　中国药物与临床２０１０年１Ｏ月第１０卷第ｌ０期Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ．Ｏｃｔ０ｂｅｒ　２０１０，Ｖｏ１．１０，Ｎ０．１０　如表１所示，布洛芬凝胶剂能显著抑制腹腔注射冰醋酸　０．０１）。此抑制作用随着给药剂量的增高而增强，但剂量依赖　后１５　ｍｉｎ内引起的小鼠扭体反应，布洛芬凝胶（４７，９８，３２０　性差异无统计学意义。　ｍｇ／ｋｓ）各剂量组与空白对照组相比差异有统计学意义（Ｐ＜　２．２凝胶剂对热板法实验的影响：见表２。　表２各组小鼠不同时点布洛芬凝胶痛阈提高率（％）的比较（；　）　如表２所示，布洛芬凝胶剂４７，９８，３２０　ｍｇ／ｋｇ低、中、高　如表３所示，布洛芬凝胶剂４７，９８，３２０　ｍｇ／ｋｇ低、中、高　各实验组与空白对照以及阳性对照组比较都能够明显提高　各实验组与空白对照比较都能够明显抑制二甲苯所致小鼠　小鼠的痛阈．通过重复测量资料的方差分析得各组问差异有　的耳肿胀度，差异有统计学意义，抑制率分别为：２６．９３％、　统计学意义（Ｐ＜０．０５）；与阳性对照比较，低、中剂量组差异有　５２．９０％、６３．２２％，呈一定的剂量依赖性。各剂量组与阳性对照　统计学意义（Ｐ＜０．０５），高剂量组差异不明显，低、中组分别于　比较中、高剂量组差异无统计学意义（Ｊｐ＞０．０５），低剂量组差异　３０、９０　ｍｉｎ时具有最大痛阈提高率分别为８０．７６％．５３．８４％；　有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。　４０．４７％，５３．３９％，痛阈提高率无剂量依赖性。　２．４凝胶剂对角叉莱胶致足跖肿胀作用的影响：见表４。　２．３凝胶剂对二甲苯致小鼠耳肿胀作用的影响：见表３。　如表４所示。布洛芬凝胶剂３０，７０，１６８　ｍｇ／ｋｇ低、中、高　表３各组小鼠耳肿胀度及肿胀抑制率的比较（　）　各实验组与空白对照比较都能够显著抑制角叉莱胶所致大　鼠的足跖肿胀作用，且在６０～２４０　ｍｉｎ达到峰值。抑制作用呈　剂量依赖性。致炎６０　ｍｉｎ后的抑制率分别为：２３．７６％、　３３．２２％、４７．００％。抑制作用可持续至２４０　ｍｉｎ，２４０　ｍｉｎ后呈现　下降趋势。与阳性对照比较由Ｄｕｎｎｅｔ检验分析可得Ｐ均＜　Ｏ．０５，具有统计学意义。说明布洛芬凝胶剂与阳性对照的抑制　作用差异有统计学意义。　３讨　论　本实验以双氯芬酸钠为阳性对照药，对布洛芬凝胶剂外　表４各组大鼠不同时点足跖肿胀度的比较（；　）　ｍｍ　用的抗炎镇痛作用进行初步探讨。　抑制作用，对于小鼠耳肿胀实验的抑制作用具有剂量依赖　实验中发现．布洛芬（４７，９８，３２０　ｍｇ／ｋｇ）凝胶剂可以剂量　性。表明在控制急性炎症方面，布洛芬局部应用具有较确切　依赖性地显著抑制醋酸所致小鼠的扭体反应，明显提高热板　的疗效。主要是因为二甲苯诱导的小鼠急性炎症模型是以增　法中小鼠的痛阈值。其作用强度与阳性对照相近，提示布洛　加耳血管通透性为主要改变的急性炎症模型，布洛芬凝胶剂　芬局部应用具有良好的炎性镇痛作用。由于热板实验是以中　可剂量依赖性抑制小鼠耳肿胀，抗炎作用明显，凝胶剂的抑　枢神经系统作为相关作用部位，１％双氯芬酸凝胶，４７，９８，３２０　制率分别为：２６．９３％、５２．９０％、６３．２２％。而角叉莱胶所致的大　ｍｇ／ｋｇ布洛芬凝胶剂和微乳剂明显改善小鼠痛阂提高百分　鼠足跖肿胀，由于是以炎性为主的亚急性炎症模型。虽然双　率，且痛阈提高率无剂量依赖性。ｌ％双氯芬酸凝胶，４７，９８，　氯芬酸凝胶和布洛芬凝胶剂均可抑制足跖肿胀形成，但其各　３２０　ｍｇ／ｋｇ布洛芬凝胶剂均可有效抑制冰醋酸对小鼠刺激引　剂量组抑制率与阳性对照相比较低。这说明布洛芬为非甾体　发的扭体，抑制率均＞４２％。本研究显示布洛芬局部应用对化　抗炎药．对慢性炎症的作用较弱．应更适用于抗急性炎症的　学性疼痛因子所致疼痛有更好的镇痛作用Ⅲ。　治疗［　。　本实验中．布洛芬凝胶剂对二甲苯所致小鼠耳肿胀和角　综上所述．布洛芬凝胶剂局部外用所表现出的较好的炎　叉莱胶所致的大鼠足跖肿胀与空白对照相比均显示出显著　性镇痛和抗炎作用，为研发此两种剂型提供了有力的依据，　中国药物与临床２０１０年ｌＯ月第１０卷第１Ｏ期Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１０，Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．１０　・ｌ１３９・　对其药效学和安全性的进一步研究将在今后的工作中继续　４　Ａｖｅｒｂｅｃｋ　Ｂ，Ｐｅｉｓｌｅｒ　Ｍ，Ｌｚｙｄｏｒｃｚｙｋ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｍｅｄｉａ—　深入。　ｔｏｒｓ　ｄｏ　ｎｏｔ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅ　ＣＧＲＰ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｉｆ　ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｓ　参考文献　ｂｌｏｃｋｅｄ　ｂｙ　Ｓ（＋）一ｆｌｕｒｂｉｐｒｏｆｅｎ　ｉｎ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｒａｔ　ｓｋｉｎ．Ｉｎｆｉａｍｍ　Ｒｅｓ，　１　朱琦，周嘉陵．氟比洛芬治疗类风湿关节炎、骨关节炎及强直　２００３，５２（１２）：５１９—５２３．　性脊柱炎．中国新药与ｌ　床杂志，２００３，２０（１）：１３—１６．　５　Ｒｉｂｅｉｒｏ　ＲＡ，Ｖａｌｅ　ＭＬ，Ｆｅｒｒｅｉｒａ　ＳＨ，ｅｔ　ａ１．　Ａｎａｌｇｅｓｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　２　杨其莲，卢静，张瑞雯，等．艾司氟比洛芬凝胶抗炎镇痛作用的　ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ　ｏｎ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｐａｉｎ．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａｅｏｌ，２０００，３９１（１／　药效学研究．中国新药与临床杂志，２００６，２５（４）：２６６—２６９．　２）：９７—１０３．　３　王瑜珍，孙成春，俞学忠．凝胶剂的研制现状．实用医药杂志，　（收稿日期：２０１０—０４—０９）　２００３，２０（８１）：６２６—６２８．　高效液相色谱法同时测定蒲公英中绿原酸　与咖Ｈ｛｝酸含量的研究　刘如良崔宇宏高天爱　蒲公英为常用中药，具清热解毒、消肿散结、利尿通淋之　入５％甲酸的甲醇溶液２５　ｍｌ，称定质量，超声处理（功率２５０　功效。蒲公英中酚酸类化合物含量丰富，尤其是咖啡酸和绿　Ｗ，频率３３　ｋＨｚ）４０　ｍｉｎ，放冷，补足减失的质量，滤过，弃去初　原酸含量较高，也是抗菌的主要成分［ｒ。本实验同时以蒲公英　滤液，取续滤液过微孔滤膜（０．４５　Ｉｘｍ），作为供试品溶液。　中的绿原酸、咖啡酸２种成分为指标，建立野生蒲公英与栽　１．２．５测定方法：精密吸取供试品溶液１０　１及对照品溶液　培蒲公英含量测定方法，并比较了蒲公英野生品与栽培品中　２　ｔｘｌ，注入液相色谱仪．测定，即得。　咖啡酸、绿原酸的含量，报告如下。　１．２．６线性关系考察：取０．１０３９　ｍｇ／ｍｌ的绿原酸对照品溶　１材料与方法　液，取０．４０２　７２　ｍｇ／ｎ￣的咖啡酸对照品溶液，分别进样１、２、　１．１仪器与试药　５、１０、１５　ｔｘｌ；测定峰面积，进样量（　１）为横坐标　，峰面积　ＷＡＴＥＲＳ　２６９５高效液相色谱仪，紫外检测器；色谱甲醇；　为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程为：绿原酸：Ａ＝３４４　８０５　超纯水：其他试剂均为分析纯。咖啡酸、绿原酸（中国药品生　一１２　８９１，ｒ＝０．９９９８。即进样量在０．１０３９～１．５５８　Ｉ，ｚｇ范围内成　物制品检定所，批号：１１０８８５—２００１０２、１１０７５３—２００４１３）；药　线性关系；咖啡酸：Ａ＝２５２　３２５　Ｘ＋２２　４９６，　０．９９９９，即进样量　材：供方法学考察的样品为：野生品，山西浑源万生黄芪开发　在０．４０２７～０．６４５　ｇ范围内成线性关系。　有限公司提供（批号０８０７０１）；其他样品为自采或市场购买；　１．２．７稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于０、２、４、１２、２４　均为蒲公英属植物。　ｈ进样，测定咖啡酸、绿原酸的峰面积。结果表明，绿原酸和咖　１．２实验方法　啡酸在室温避光放置２４　ｈ稳定，相对标准偏差（ＲＳＤ）均为　１．２．１色谱条件的选择：色谱柱：Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ　ｋｒｏｍｏｓｉｌ　Ｃ１８（４．６　１．５％。　ｍｍ￣２５０　ｍｍ，５　Ｉ，ｚｍ）；检测波长：３２７　ａｍ；经二极管阵列检测　１．２．８重复性试验：取同批样品，依法平行测定６份，分别计　器检测，绿原酸的最大吸收波长为３２５　ｎｍ：咖啡酸的最大吸　算绿原酸、咖啡酸的含量，结果每１　ｇ含绿原酸平均为０．５２８　收波长为３２７　ｌｑｍ；故选择３２７　ｒｉｍ为测定吸收波长。室温２５　ｍｇ，每１　ｇ含咖啡酸平均为０．８２５　ｍｇ，ＲＳＤ值分别为１．７％、　；流速：１．０　ｍｌ／ｍｉｎ；流动相：甲醇：ｌ％冰醋酸（２８：７２）。　１．０％，表明该方法重复性良好。　１．２．２色谱系统适用性试验：在上述色谱条件下，样品中绿原　１．２．９精密度考察：精密吸取同一份供试品溶液，重复进样６　酸、咖啡酸与其他组分达到了基线分离。理论塔板数按绿原　次，记录咖啡酸、绿原酸的峰面积，咖啡酸、绿原酸的峰面积　酸计算不低于３０００。　ＲＳＤ值分别为１．５％、１．４％，表明该方法精密度良好。　１．２．３对照品溶液的制备：分别精密称取绿原酸、咖啡酸对照　１．２．１０加样回收率试验：采用加样回收方法，分别精密量取　品１Ｏ．３９、１０．６８　ｍｇ，分别置５０　ｍｌ容量瓶中，加甲醇至刻度，　１．２　ｍｌ绿原酸对照品（０．２０７８　ｍｇ／ｍ１）、２．０　ｍｌ咖啡酸对照品　摇匀，即得（绿原酸Ｏ．２０７８　ｍ＃ｍｌ、咖啡酸０．２１３６　ｍｇ／ｍ１）。　（０．２１３６　ｍｇ／ｍ１）减压浓缩至干，加入已知含量的样品（绿原酸　１．２．４供试品溶液的制备：精密称取蒲公英样品１　ｇ．精密加　含量０．５２８　ｍｇ／ｇ、咖啡酸含量０．８２５　ｍｇ／ｇ）０．５　ｇ，按照２．４方法　作者单位：０３００１３太原，山西省肿瘤医院药学部（刘如良）；山西　制备供试品溶液，依法测定，准确度结果符合要求。见表１。　省药品检验所中药室（崔宇宏），中药标本室（高天爱）　１．２．１１不同来源野生品及栽培品中绿原酸和咖啡酸的含量：