一、实验目的
本实验旨在通过观察不同处理条件下洋葱鳞茎表皮细胞骨架形态的变化，探讨非骨架蛋白抽提时间、钙离子、秋水仙素等因素对洋葱细胞骨架显微观察的影响，以进一步了解细胞骨架在维持细胞结构稳定、保持细胞完整性以及细胞功能完善中的重要作用。
二、实验材料与方法
1. 材料：新鲜洋葱鳞茎的内表皮
2. 仪器：培养箱、显微镜
3. 试剂及其配置：1% Triton X-100/M-缓冲液固定液，3% 戊二醇，pH为 7.4 的考马斯亮蓝 R250 染液/L 磷酸盐缓冲生理盐水（PBS），M-缓冲液，3% 戊二醇
4. 实验方法
(一) 试验方法
a) 洋葱细胞骨架制备的关键条件优化
取洋葱内表皮 8 张，大小约为 1 cm×1 cm，放到培养皿中，然后用 1% Triton X-100 分别处理洋葱内表皮以优化最佳观察条件。
b) 钙离子处理方法
取洋葱内表皮 8 张，大小约为 1 cm×1 cm，分别取两张浸入 1% 氯化钙溶液中处理 2 小时，另外两张不作处理，设为对照。
c) 秋水仙素处理方法
取洋葱内表皮 4 张，大小约为 1 cm×1 cm，两张浸入 1% 秋水仙素溶液中处理 24 小时，另 2 张不作处理，设为对照。
(二) 细胞骨架的制片与观察
首先将洋葱片放入装有 pH 值为 7.4 的磷酸缓冲溶液的小玻璃瓶中，使其下沉，然后吸去磷酸缓冲液，用 1% Triton X-100 处理 25 分钟（抽提骨架以外的蛋白质），吸去 1% Triton X-100 后，用 M-缓冲液洗 3 次，每次 3 分钟，洗涤的同时可以稳定细胞骨架，再用 3% 戊二醇固定 15 分钟，吸去戊二醇后，用 PBSS 洗 3 次，每次 3 分钟，用 1% 考马斯亮蓝 R250 染色 15 分钟，用蒸馏水洗涤 2 次，取出洋葱鳞茎内表皮，展平在载玻片上，空气干燥，最后镜检。
三、讨论
细胞骨架是细胞内弹性框架结构，对维持细胞结构的稳定、保持细胞完整性以及细胞功能的完善有着重大意义。而细胞骨架本身也容易受外界因素影响而发生变化的，如化学因素，物理因素都可能会造成骨架蛋白的变性。
四、实验结果与分析
(一) 非骨架蛋白抽提时间对洋葱细胞骨架显微观察的影响
通过优化实验条件，发现不同的非骨架蛋白抽提时间对洋葱细胞骨架显微观察结果有显著影响。在适当的时间范围内，随着非骨架蛋白抽提时间的延长，洋葱细胞骨架显微观察结果逐渐清晰。然而，当非骨架蛋白抽提时间过长时，洋葱细胞骨架显微观察结果变得模糊，可能是由于细胞骨架结构受到破坏所致。
(二) 钙离子、秋水仙素与洋葱鳞茎内表皮细胞骨架形态的关系
钙离子处理组和秋水仙素处理组的洋葱内表皮细胞骨架形态与对照组相比存在显著差异。钙离子处理组洋葱内表皮细胞骨架呈现出明显的丝状结构，而秋水仙素处理组洋葱内表皮细胞骨架呈现出明显的纤维状结构。这表明，钙离子和秋水仙素处理可能对洋葱细胞骨架形态产生显著影响。
五、结论
本实验通过观察不同处理条件下洋葱鳞茎表皮细胞骨架形态的变化，探讨了非骨架蛋白抽提时间、钙离子、秋水仙素等因素对洋葱细胞骨架显微观察的影响。实验结果表明，这些因素对洋葱细胞骨架形态具有显著影响。本实验为进一步研究细胞骨架的功能和作用提供了实验依据。